一、相差显微镜的特点　　

　　相差显微镜是一种将光通过透明标本细节产生的光程差(即相位差)转化为光强差的专用显微镜。

　　当光通过相对透明的标本时，光的波长(颜色)和振幅(亮度)没有明显的变化。因此，用普通光学显微镜观察未染色的标本(如活细胞)时，其形态和内部结构往往难以分辨。光的相位差肉眼是感觉不到的，而相差显微镜通过其特殊的装置环形光阑和相位板，可以将光的相位差变成人眼可以感知的振幅差(亮度差)，使原本透明的物体呈现出明显的亮度差，对比度增强，使我们能够清晰地观察到活细胞和细胞内一些普通光学显微镜和暗场显微镜下看不到或看不到的细微结构。

　　二、相差显微镜的成像原理

　　显微检查时，光源只能通过环形光阑的透明圈，通过聚光镜后会聚成一束光束。当这种光束通过被检物体时，由于各部分光路不同，光束会发生不同程度的偏转(衍射)。因为透明环形成的像正好落在物镜的后焦面上，并与相位板上的共轭平面重合。两组光通过后透镜会聚后再次在同一光路上传播，会造成直射光和衍射光相互干涉，将相位差变为振幅差。这样，人眼分辨不出的相位差，就被无色透明体的光转换成了人眼可以分辨的振幅差(明暗差)。

　　三、相差显微镜的应用范围、操作步骤及注意事项

　　1.适用范围相差显微镜可以观察透明样品的细节，适用于观察活细胞的生长、运动、增殖和精细结构。因此，它是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细胞工程和杂交瘤技术等现代生物学研究的必要工具。

　　2.操作步骤

　　(1)根据被观察标本的性质和要求，选择合适的相差物镜。

　　(2)将标本放在载物台上。

　　(3)调整光轴的中心。

　　(4)取下一侧的目镜，换上合轴调节望远镜，调节环形光阑与相位板上的共轭面环完全重合，然后取下合轴调节望远镜，换回目镜。在使用中，如果物镜倍数需要改变，需要再次调整环形光阑，使其与相位板共轭面环重合。

　　(5)戴上绿色滤光片，即可进行镜检。显微镜检查操作与普通光学显微镜相同。

　　3.有关注意事项

　　(1)聚光镜的视场光阑和孔径光阑都需要朝上，光源要强一些。因为环形光阑阻挡了大部分光，所以物镜相位板上的共轭表面吸收了大部分光。

　　(2)不同类型的光学元件不能互换使用。

　　(3)载玻片和盖玻片的厚度应遵循标准，不能太薄或太厚。

　　(4)切片不宜过厚，一般以5-10μm为宜，否则会引起其他光学现象，影响相差显微镜成像质量。