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一分钟讲解相差显微镜的原理和特点


【概要描述】相差显微镜可以观察透明样品的细节,适用于观察活细胞的生长、运动、增殖和精细结构。相差显微镜是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研究必不可少的工具。

   相差显微镜可以观察透明样品的细节,适用于观察活细胞的生长、运动、增殖和精细结构。相差显微镜是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研究必不可少的工具。


  一、相差显微镜的工作原理


  检查时,只有当透射光的波长(颜色)和振幅(亮度)随周围介质有明显变化时,才能用眼睛分辨样品。当照明光通过无色透明物体时,透射光的波长和振幅没有明显变化,尤其是振幅几乎没有变化。当用普通光学显微镜观察时,很难区分这种物体的结构。有必要通过相差显微镜,利用固色、染色等物理化学方法,使样品的透射光与背景在波长或振幅上发生变化,即在颜色和亮度上有差异,以进行鉴别。

       相差显微镜

  一束光通过不同折射率的透明介质后,衍射光和透射直射光的波长没有明显变化,但衍射光的振幅略小于直射光,这也是透明异质材料中明暗变化微小的原因,但这种变化很小,无法有效区分。明显的变化是衍射光在相位上落后于透射光1/4.人眼虽然不能分辨相位差,但可以分辨振幅和波长的变化。相差显微镜利用这一点将相位差转化为振幅变化,即显示所有透明但折射率不同的结构的明暗差异,以便清晰区分。


  二、相差显微镜的特点


  相差显微镜将透过标本的可见光光程差变为振幅差,从而提高各种结构之间的对比度,使其清晰可见。光通过标本后发生折射,偏离原光路,延迟1/4(波长)。如果增加或减少1/4.光程差变为1/2.两束合并后,干涉加强,振幅变大或减小,以提高对比度。在结构上,相差显微镜有两个不同于普通光学显微镜的特点:


  1.环形光阑:位于光源和聚光器之间,作用是使通过聚光器的光线形成空心光锥,聚焦在标本上。


  2、相位板:在物镜上加入涂有氟化镁的相位板,可以将直射光或衍射光的相位延迟1/4.有两种类型:


  (1)A+相板:直射光延迟1/4.两组光波合并后,振幅变大,标本结构变得比周围介质亮,形成亮对比(或负对比)。


  (2)相差显微镜B+相板:衍射光延迟1/4.两组光线合并后减去光波,使振幅变小,形成暗对比度(或正对比度),结构变得比周围介质暗。


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