相差显微镜可以观察透明样品的细节，适用于观察活细胞的生长、运动、增殖和精细结构。相差显微镜是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研究必不可少的工具。

　　一、相差显微镜的工作原理

　　检查时，只有当透射光的波长(颜色)和振幅(亮度)随周围介质有明显变化时，才能用眼睛分辨样品。当照明光通过无色透明物体时，透射光的波长和振幅没有明显变化，尤其是振幅几乎没有变化。当用普通光学显微镜观察时，很难区分这种物体的结构。有必要通过相差显微镜，利用固色、染色等物理化学方法，使样品的透射光与背景在波长或振幅上发生变化，即在颜色和亮度上有差异，以进行鉴别。

　　一束光通过不同折射率的透明介质后，衍射光和透射直射光的波长没有明显变化，但衍射光的振幅略小于直射光，这也是透明异质材料中明暗变化微小的原因，但这种变化很小，无法有效区分。明显的变化是衍射光在相位上落后于透射光1/4.人眼虽然不能分辨相位差，但可以分辨振幅和波长的变化。相差显微镜利用这一点将相位差转化为振幅变化，即显示所有透明但折射率不同的结构的明暗差异，以便清晰区分。

　　二、相差显微镜的特点

　　相差显微镜将透过标本的可见光光程差变为振幅差，从而提高各种结构之间的对比度，使其清晰可见。光通过标本后发生折射，偏离原光路，延迟1/4(波长)。如果增加或减少1/4.光程差变为1/2.两束合并后，干涉加强，振幅变大或减小，以提高对比度。在结构上，相差显微镜有两个不同于普通光学显微镜的特点：

　　1.环形光阑：位于光源和聚光器之间，作用是使通过聚光器的光线形成空心光锥，聚焦在标本上。

　　2、相位板：在物镜上加入涂有氟化镁的相位板，可以将直射光或衍射光的相位延迟1/4.有两种类型：

　　(1)A+相板：直射光延迟1/4.两组光波合并后，振幅变大，标本结构变得比周围介质亮，形成亮对比(或负对比)。

　　(2)相差显微镜B+相板：衍射光延迟1/4.两组光线合并后减去光波，使振幅变小，形成暗对比度(或正对比度)，结构变得比周围介质暗。